Kuinka tunnistaa bakteeri

Sisältö

• vaiheet
• Menetelmä 1 Tunnista bakteeri Gram-värjäyksellä
• Menetelmä 2 Suorita Ziehl-Neelsen-värjäystesti
• Menetelmä 3 Tutki bakteerien käyttäytymistä ja ulkonäköä
• Menetelmä 4 Tulkitse kaikki tulokset

Tässä artikkelissa: Tunnista bakteeri Gram-värjäyksellä Suorita Ziehl-Neelsen -värjäystestiTutkimus bakteerien käyttäytymistä ja ulkonäköäTulosta kaikki tulokset43 Viitteet

Bakteerien tunnistaminen on monimutkainen tehtävä. Yksi syy on, että arvioiden mukaan maailmassa on 10 000–1 miljardia bakteerilajia! Bakteerien asianmukainen tunnistaminen on erittäin tärkeää, etenkin lääketieteen alalla, jossa sairauden oikea hoito riippuu suurelta osin ongelmaa aiheuttavan mikrobin tyypistä. Useimmissa tapauksissa tunnistaminen tehdään eliminoinnin perusteella. Bakteerin tunnistamiseksi sinun on suoritettava värjäyskokeet, analysoitava sen ulkonäkö ja tarkkailtava, kuinka se reagoi hyvin erilaisiin olosuhteisiin. Jos tarvitset nopeaa tulosta, ota DNA-näyte laboratorioon lähettämistä varten.

vaiheet

Menetelmä 1 Tunnista bakteeri Gram-värjäyksellä

1. määrittää jos bakteerit ovat gram-positiivisia tai negatiivisia. Gram-värjäys on menetelmä jakaa bakteerit kahden yleisimmän tyypin välillä: gram-positiivinen ja gram-negatiivinen. Edellisillä on paksu soluseinä, joka koostuu peptidoglykaaniksi kutsutusta polymeeristä, joka värjää parhaiten gramnegatiivisten bakteerien ohuina seinäminä.
   • Jotkut yleisimmät grampositiivisten bakteerien tyypit ovat streptokokit, stafylokokit, mikrokokit (tai mikrokokit) ja listeria.
   • Tässä on joitain yleisiä esimerkkejä gramnegatiivisista bakteereista: Neisseria, Acinetobacter, Moraxella, Enterobacteriaceae, Vibrio, Haemophilus, Fusobacterium ja Campylobacter.
2. Suorita asianmukaiset suojatoimenpiteet. Testin aikana käytettävät bakteerit ja kemialliset elementit ovat vaaraksi terveydelle. Värjäyskokeen suorittamisessa on käytettävä suojalaseja, kertakäyttöisiä nitriilikäsineitä ja laboratoriotakkia. Kun olet valmis, laita käsineet ja kaikki muut saastuneet materiaalit erityiseen pussiin. Muista noudattaa laboratorion ohjeita päästäksesi eroon saastuneiden tuotteiden pussista.
3. Pane näytettävä näyte lasille. Aloita testi asettamalla tippa tai bakteerinäyte steriilille objektilevylle. Liu'uta sitten terä Bunsen-polttimen yli, joka on valaistu kolme kertaa, jotta näyte kiinnittyy ja estää sitä pääsemästä levyltä, kun huuhtelet tai lisäät reagensseja.
4. Lisää terään 5 tippaa purppuraa kristallia. Kaada viisi tippaa kristalli violettiliuosta näytteeseen. Odota minuutti, kunnes näyte absorboi kideviolettia.
   • Pidä terää paikallaan pyykkitapeilla, jotta et värjää käsiäsi.
5. Pese terä huolellisesti tahran poistamiseksi. Käytä hanaa tai purista pulloa ja anna veden käydä hyvin hitaasti jopa viiden sekunnin ajan, jotta poistetaan mustejäämät, jotka eivät ole kiinnittyneet näyteeseen.
6. Kaada viisi tippaa gramdiodimaalia dian päälle. Se on diodista, natriumbikarbonaatista ja kaliumdioksidista koostuva liuos, joka saa kidevioletin sulamaan bakteerien soluseinien kanssa. Kaada viisi tippaa liuosta näytteeseen ja anna sen olla minuutin ajan.
7. Pese näyte alkoholilla tai maitohapolla. Alkoholi ja asetoni ovat valkaisuaineita ja poistavat bakteerisolujen värjäytymisen, jos ne ovat gramnegatiivisia. Kaada muutama tippa valkaisuainetta näytteeseen ja anna sen toimia enintään kolme sekuntia. Kokeile sen jälkeen huuhtele varovasti vedellä viiden sekunnin ajan näiden valkaisuaineiden poistamiseksi.
   • Jos annat valkaisuaineen toimia pitkään, se voi johtaa gram-positiivisten bakteerien värjäytymisen häviämiseen, mikä johtaa väärään negatiiviseen.
8. Suorita kontrastikoe safraniinilla. Safraniini on punainen väriaine, joka on toisin kuin kristalli violetti, värjäten siten bakteereja, joille violetti värjäys ei vaikuta. Kaada noin viisi tippaa safraniinia näytteeseen ja anna sen olla minuutin ajan. Kokeile sen jälkeen huuhtele varovasti vedellä viiden sekunnin ajan.
9. Kuvittele näyte 1000-kertaisella suurennuksella. Bakteerista tulee violetti tai violetti, jos se on gram-positiivinen, tai vaaleanpunainen, jos se on gram-negatiivinen safraniinin takia.

Menetelmä 2 Suorita Ziehl-Neelsen-värjäystesti

1. Käytä tätä tekniikkaa haponkestävien bakteerien havaitsemiseksi. Nämä lajit sisältävät suuremman määrän lipidejä, mikä tekee niistä kestävämpiä Gram-värjäyksessä käytetyille väriaineille. Happiresistentit bakteerit kuuluvat Mycobacterium-sukuun, johon kuuluu tuberkuloosista (M. tuberculosis) vastuussa oleva bakteeri. Happokestävän bakteerin värjäämiseen on käytettävä punaista väriainetta, nimeltään karboolifuksiini, joka kestää huuhtelua happamilla tai rikkihappoliuoksilla.
2. Suorita asianmukaiset suojatoimenpiteet. Ziehl-Neelsen-värjäyksessä käytetyt kemialliset ja biologiset materiaalit voivat olla vaarallisia. Lisäksi sinun on käytettävä myös lämmönlähteitä, kuten Bunsen-suutin, sähkölämmitin tai alkoholilamppu. Suorita testi noudattamalla alla olevia ohjeita.
   • Laita suojalasit, nitriilikäsineet ja laboratoriotakki.
   • Varo hengittämästä väriaineiden ja valkaisuaineiden höyryjä. Älä anna pisaroiden roiskuttaa silmiäsi tai ihoasi. Pidä astiat auki konepellin alla.
   • Ole erittäin varovainen terää lämmitettäessä. Suurin osa käytetyistä kemikaaleista on syttyviä. Levyissä tai muissa laitteissa voi olla myös palavia aineita.
3. Valmistele terä. Levitä tasaisesti pieni määrä bakteerinäytettä pyöreällä liikkeellä steriilin levyn keskelle. Näytteesi tulisi olla noin 10 - 20 mm.
4. Kuivaa terä. Aseta terä kuivausrakenteeseen näyte ylöspäin. Anna sen kuivua luonnollisesti 30 sekuntia. Älä yritä kuivata terää kankaalla.
5. Kiinnitä näyte kuumuudella. Kun näyte ylös, liu'uta terä kaksi tai kolme kertaa valaistu Bunsen-polttimen yli. Voit sijoittaa terän myös sähkölämmittimeen asettamalla lämpötilan välillä 65 ° C - 75 ° C vähintään kahdeksi tunniksi. Ole varovainen, ettet kiehu tai polta näytettä.
6. Lisää karboolinen fuksiini terään. Kaada useita tippoja tätä liuosta objektilasille. Kaada tarpeeksi peittääksesi näytteen kokonaan.
7. Kuumenna terä väriaineen kiinnittämiseksi. Lämmitä kalvo varovasti Bunsen-polttimen tai alkoholilampun päällä, näyte osoittaa ylöspäin, tai aseta se sähkölämmittimeen. Kuumenna terä 60 ° C: seen tai kunnes se alkaa vapauttaa höyryä. Anna väriaineen toimia viiden minuutin ajan.
   • Jos käytät sähkölämmitintä, kytke se päälle 60 ° C: ssa. Jos valitset alkoholilampun tai Bunsen-polttimen, sinun tulee odottaa näkevän höyryjä.
   • Lämmitä sitä ajoittain, jotta terä pysyy halutussa lämpötilassa viiden minuutin ajan.
   • Ole varovainen, ettet keitä, polta tai kuivaa näytettä.
8. Huuhtele terä kylmällä vedellä. Anna sen jäähtyä viiden minuutin ajan ja huuhtele varovasti muutama sekunti puhtaalla vedellä. Käytä vesijohtovettä tai purista pulloa värjäyspisteiden poistamiseksi, jotka eivät ole kiinni näytteessä.
9. Kaada näyte happamaa alkoholia tai rikkihappoa. Käytä näytteen peittämiseen 3 tilavuusprosenttia (tilavuus / tilavuus) alkoholia tai 20-prosenttista rikkihappoa. Anna hapon toimia, kunnes väri haalistuu ja saavuttaa erittäin kirkkaan vaaleanpunaisen sävyn. Prosessi kestää yleensä noin kymmenen minuuttia.
10. Huuhtele terä puhtaalla vedellä. Pese terä varovasti hana alla tai purista pullolla. Poista kaikki happo- ja väriainejäämät hyvin.
11. Lisää varjoaine. Kun olet huuhdellut levyn, kaada malakiittivihreä tai metyleenisininen väriaine päälle. Nämä kaksi ratkaisua luovat sinertävän tai vihertävän taustan, josta punainen väriaine tulee esiin, samoin kuin muut biologiset materiaalit, kuten ihmisen solut ja hapottomat resistentit bakteerit. Anna aineiden toimia yhden - kahden minuutin ajan.
12. Huuhtele ja kuivaa terä. Huuhtele huolellisesti vedellä ylimääräisen kontrastin poistamiseksi. Kun olet valmis, kuivaa terän takaosa kuivalla kankaalla ja anna sen kuivua luonnollisesti jalustalla.
13. Kuvittele näyte 1000-kertaisella suurennuksella. Happoresistentit bakteerit muuttuvat punaisiksi tai tummanpunaisiksi. Muut bakteerit, ei-bakteerisolut ja terän pohja muuttuvat vihreäksi tai siniseksi.

Menetelmä 3 Tutki bakteerien käyttäytymistä ja ulkonäköä

1. Analysoi bakteerien muoto. Kun värjäyskoe on suoritettu sen määrittämiseksi, ovatko bakteerit grampositiivisia, gramnegatiivisia vai haponkestäviä, on aika tunnistaa lajit tarkemmin. Ensin analysoidaan näytteen bakteerien muoto. Kolme yleisintä muotoa ovat cocci (pallomainen), spiraali ja bacilli (sauvan muoto).
   • Näistä muodoista on useita muunnelmia. Esimerkiksi pyöreän muotoiset bakteerit (coccus) voivat esiintyä pareittain (diplokokit), ketjuina, kasoissa tai neljään ryhmään (tetradit).
2. Selvitä, ovatko bakteerit aerobisia vai anaerobisia. Ota kaksi näytettä bakteereista ja luo kaksi erillistä viljelmää. Kuun on oltava anaerobinen (kasvanut ilman happea), kun taas toisen on oltava aerobinen (kasvatettu hapolla). Säilytä anaerobinen viljelmä 35 ° C: ssa hapottomassa paikassa vähintään 48 tuntia ennen kasvun tarkkailua.
   • Jos bakteerit kasvavat ympäristössä, jossa ei ole happea, mutta ei altistuessaan happea, se tarkoittaa, että ne ovat anaerobisia.
   • Vaikka ne kehittyvät hapetetussa ympäristössä, mutta eivät ilman happea, ne ovat aerobisia.
   • Kun ne kehittyvät molemmissa ympäristöissä, puhumme fakultatiivisista anaerobisista bakteereista.
3. Suorita liikkuvuustesti. Bakteeri on liikkuva, jos se voi liikkua yksin yhden tai useamman flagellan kanssa. Liikkuvuusaste on erittäin tärkeä tiettyjen bakteerilajien tunnistamisessa. Liikkuvuutta on useita tyyppejä, mutta turvallisin ja luettavin tapa on puolikiinteä väliaine.
4. Luo kulttuuri liikkuvuustestiä varten. Valmista bakteeriviljelmä viljelmäliemessä. Valmista valitsemasi lieme noudattamalla alla olevia ohjeita.
5. Inokuloidaan viljelmä puolijähmeään agariin liikkuvuuskokeita varten. Päällystä osa liemeviljelmästä steriilillä ymppäysneulalla. Istuta neula varovasti testiä varten valmistautuneeseen puolikiinteään dagar-putkeen, kuten TTC lagar. Neulan on läpäistävä 2/3 agarista.
   • Kun olet valmis, poista neula varovasti ja varo ylittämästä rokotusalueen rajoja.
   • Inkuboi putkea 30 ° C: ssa 48 tunnin ajan.
6. Lue testitulos. Liikkuvuustestin agar muuttuu punaiseksi kosketuksessa bakteereihin. Jos ne ovat liikkuvia, tämä punainen tai vaaleanpunainen sävy leviää koko aineeseen. Muutoin värjäys rajoittuu injektiokohtaan.

Menetelmä 4 Tulkitse kaikki tulokset

1. Kerää kommenttisi. Bakteerien tuntemiseksi sinun on kerättävä viljelmistä saatavat tiedot, värjäystestit ja muotojen havainnot. Jos tutkit potilaan näytteitä, heidän esiintymisensä oireet voivat myös auttaa määrittämään sopivan bakteerityypin.
   • Esimerkiksi, jos testit osoittavat, että bakteerit ovat gramnegatiivisia, anaerobisia, liikkumattomia ja huomaat potilaassa oireita, kuten vatsakipuja, pahoinvointia ja oksentelua, on todennäköistä, että potilas kärsii Bacteroides-tartunnasta. fragilis.
2. Etsi tietokantaa. Maailmassa on tuhansia bakteerilajeja. On mahdotonta tietää kaikkea sydämestä. Sinun on todennäköisesti tutkittava kliinistä mikrobiologiakirjaa tai online-tietokantaa testitulosten vertaamiseksi bakteerilajeja koskeviin tietoihin.
   • Bakteerien tunnistamiseen on erinomaisia ​​verkkoresursseja, mutta suurin osa näistä tietokannoista on saatavana englanniksi, mukaan lukien Patricbrc.org ja GlobalRPh. Voit kuitenkin löytää hyödyllisiä tietoja INRA International Microbial Resource Center -sivustolta.
3. Suorita geenitesti tietääksesi bakteerien tarkat lajit. Joissain tapauksissa saatat joutua tunnistamaan bakteerilajit. Nopein ja helpoin menetelmä on suorittaa DNA-testi. DNA-testit ovat hyödyllisiä myös perinteisten värjäysmuotojen ja viljelyn vastustuskykyisten bakteerien tunnistamisessa. Nykyään mikro-organismien DNA-testit ovat erittäin nopeita ja voivat olla valmis alle kahdessa tunnissa.
   • Jos sinulla ei ole pääsyä laboratorioon, joka suorittaa mikro-organismien geneettisen sekvensoinnin, lähetä bakteerinäyte erikoistuneelle virastolle.